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石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡實驗周期及交付標準
石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡實驗周期及交付標準
更新時間:2023-10-20
訪問量: 3950
廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家

服務名稱:石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡實驗周期及交付標準
提供商:上海研研謹生物
規(guī)格:石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡
價格:15元

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡實驗周期及交付標準產(chǎn)品概述:

TUNEL凋亡顯色法

TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細胞凋亡的原理是當細胞發(fā)生凋亡時,DNA內(nèi)切酶被激活,核小體間的基因組DNA被切斷,暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)

加上帶有生物素(Biotin) 標記的dUTP即Bitin-dUTP.,隨后于辣根過氧化物酶 (HRP) 標記的streptavidin結(jié)合, 在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細胞,從而可以通過普通光學顯微鏡檢測到細胞凋亡。


實驗意義

1. TUNEL法是一種分子生物學 與形態(tài)學相結(jié)合的研究方法,可對完整的單個凋亡細胞或者凋亡小體進行原位染色,可以準確反映細胞凋亡典型的生物化學和形態(tài)特征。

2.可用于石蠟切片冰凍切片培養(yǎng)的細胞等進行細胞凋亡檢測,靈敏度遠比一般的組織化學和生物化學方法要高。

3.操作簡便快捷,在細胞凋亡的研究中被廣泛采用。


實驗步驟


1.石蠟切片TUNEL顯色法:

①石蠟切片常規(guī)脫蠟至水,脫蠟劑二甲苯,至水劑乙醇;

②PBS漂洗3*5 min; .

③加入蛋白酶K工作液37°C反應15-30 min, PBS漂洗3x5 min;

④4%多聚甲醛(pH7 .4的PBS)室溫固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;

⑤浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;

⑥加入適量TdT酶反應液,暗濕盒中37°C反應1 h,用SSC室溫15 min終止反應后,PBS漂洗3x5 min; .

⑦浸入0.3% H202封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性,室溫孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;

⑧滴加Streptavidin-HRP工作液,37*C反應30-60 min, PBS漂洗3x5 min;

⑨滴加DAB顯色液后用去離子水漂洗數(shù)次;

10.選擇是否用DAPI復染細胞核;

脫水、透明、中性樹膠封片后進行觀察。


2.冰凍切片TUNEL顯色法:

①新鮮組織經(jīng)處理后,立即在恒冷冰凍切片機內(nèi)切片,厚度為5~6 um;

②防脫玻片,貼片,室溫陰干約12 h;

③4%多聚甲醛(pH7 4的PBS)室溫固定10 min, PBS漂洗3x5 min;

④浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;

⑤浸入邇透液(0.1% Triton X-100溶于PBS中),室溫通透30 S-2 min;

⑥加入適量TdT酶反應液,暗濕盒中37°C反應1 h,用SSC室溫15 min終止反應后,PBS漂洗3x5 min; .

⑦浸入0.3% H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性,室溫孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;

⑧滴加Streptavidin-HRP工作液,379C反應30-60 min, PBS漂洗3x5 min;

⑨滴加DAB顯色液后用去離子水漂洗數(shù)次:

@選擇是否用DAPI復染細胞核;

脫水、透明、中性樹膠封片后進行觀察。


實驗完成周期及交付標準

1.實驗周期: 1-2周

2.交付標準:蠟塊、切片、染色圖片.實驗報告(實驗步驟、試劑、耗材等)


需確認的信息

1.樣本的種屬.

2.樣本的類型(固定的組織or蠟塊or切片)

3.是否提供試劑盒

4.拍照要求


收費標準服務周期提供結(jié)果:

歡迎咨詢詳談,我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務協(xié)議。

更多實驗技術(shù)服務請瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容,或來電詢!

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如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

 

實驗代做服務:

 

試劑盒免費代檢測

石蠟冰凍切片TUNEL凋亡熒光

掃描電鏡服務

實驗室代做實驗項目

 

透射電鏡服務實驗服務

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實驗服務

細胞熒光染料標記檢測實驗

 

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

HE染色

六胺銀法染色實驗服務

天狼猩紅染色實驗服務

 

網(wǎng)狀纖維染色銀染實驗服務

染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務

 

免疫組化IHC染色實驗服務

油紅O染色實驗服務

ATP/ADP檢測實驗服務

蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務

免疫共沉淀(Co-IP)實驗代做

免疫細胞化學ICC實驗服務

PKC活性檢測實驗

免疫共沉淀(CHIRP)實驗

 

蛋白雙向2D-WB電泳實驗服務

端粒酶活性檢測實驗

探針合成實驗服務

NF-KB p65活性檢測實驗

 

喹諾酮類快速檢測試劑盒

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒


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