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阿奇霉素快速檢測試劑盒說明書
點擊次數(shù):327 更新時間:2025-04-16

阿奇霉素

快速檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物阿奇霉素將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗阿奇霉素抗體,加入酶標記物后,TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物阿奇霉素的含量成負相關,與標準曲線比較即可得出相應殘留物阿奇霉素的含量。

二、試劑盒特性

產(chǎn)品貨號:       YJ63A\J1

  度:       0.05ppb

孵育溫度:       25

孵育時間:       30min15min

樣本檢測下限

        ······································· 0.5ppb

        ······································· 0.5ppb

        ······································· 0.5ppb

交叉反應率

阿奇霉素Azithromycin ···················· 100%

紅霉素Erythromycin ···················· <1%

泰勒菌素Tylosin ···························· 30%

替米考星Tilmicosin ························ 23%

樣本回收率

     ·································  70%~120%

三、試劑盒組成

1

微量測試孔

每條8孔,一板12

2

標準液×6

1ml/瓶)

0ppb

0.05ppb

0.15ppb

0.45ppb

1.35ppb

4.05ppb

3

高濃度標準品

1ml

100ppb

4

酶標記物

7ml

紅色帽

5

抗體工作液

7ml

藍色帽

6

底物A

7ml

白色帽

7

底物B

7ml

黑色帽

8

終止液

7ml

黃色帽

9

20X濃縮洗滌液

15ml

白色帽

10

20X提取液A

15ml

黃色帽

11

2X提取液B

50ml*2

透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器:酶標儀、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)、恒溫箱、打印機

微量移液器:單道 20200µl、單道1001000µl、多道30300 µl

      劑:氫氧化鈉、甲醇

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結果。

樣本前處理需配制:

配液1  提取液A

        120X提取液A+ 19份去離子水混合。

配液2  提取液B

        12X提取液B+ 1份去離子水混合。

配液3  1M  NaOH溶液

        稱取4g氫氧化鈉固體加去離子水定容至100ML。

配液4  10%甲醇

        1無水甲醇+ 9份去離子水混合

樣本處理: 

a組織樣本的處理方法

1、 2±0.05g均質后的組織至50ml離心管中,加入3ml提取液A,渦旋振蕩3min;

2、再加入600µl 1M  NaOH溶液和2.4ml 提取液B,渦旋振蕩3min;室溫4000r/min以上離心5min

3、50 µl上層液體用于分析。(注:離心后若有脂肪層,去除脂肪層或撥開脂肪層,取清澈液體進行分析)。

樣本稀釋倍數(shù):  4

此方法為多合一(組合Ⅱ)處理方法,樣本可合一處理。

b組織(雞肉、鴨肉)、雞蛋、牛奶樣本處理方法

1、 稱取均質后的新鮮樣本1±0.05g50ml離心管中,加入5ml 10%甲醇,振蕩3min,室溫4000r/min以上離心5min;

2、 50 µl上清用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  5 

 

六、 酶標免疫分析程序:

測定前應須知:

1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(20-25)。

2、 使用之后立即將所有試劑放回28。

3、 ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。

4、 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟:

1、 28冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20-25)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于28。

3、 配液:洗滌液配制

15ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水

按照1:19稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子

水),或按所需用量配制洗滌液。

4、 編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

5、 加標準品/樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜蓋板,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境反應30min。

6、 將孔內液體甩干,用洗滌液250µl/孔洗板45次,每次間隔15-30秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

7、 顯色:加入底物A50µl/孔,再加入底物B50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25環(huán)境中避光顯色15min

8、 測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內讀數(shù)),測定每孔OD值。

七、結果判定

結果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含阿奇霉素量成負相關。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標準液吸光度值分別是:0ppb2.243; 0.05ppb1.8160.15ppb1.415;0.45ppb0.74;1.35ppb0.313;4.05ppb0.155。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb4.05ppb;樣本2的濃度范圍是0.15ppb0.45ppb,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中阿奇霉素實際濃度。

2、定量分析

1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標準(0標準)的吸光度值,再乘以100%,即

 

百分吸光%)=

B

×100%

B0

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

2)標準曲線的繪制與計算

以標準品百分吸光率為縱坐標,以阿奇霉素標準品濃ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中阿奇霉素實際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。(歡迎來電索?。?/span>

八、 注意事項

1、 室溫低于25℃或試劑及標本未回到室溫(2025℃)會導致所有標準的OD值偏低。

2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標準曲線不成線性,重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

3、 混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復性不好的現(xiàn)象。

4、 反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。

5、 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。

6、 不用的微孔板放進自封袋重新密封;標準物質和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

7、 顯色液若有任何顏色表明變質,應當棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質。

8、 該試劑盒最佳反應溫度為25℃,溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲藏條件和保質期

1、 儲藏條件:試劑盒于28保存,不要冷凍。

2、   期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實驗結果,請放心使用。

實驗技術服務:

 


滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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